Examinando por Autor "Toro, Lenka"

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    PublicaciónAcceso abierto
    Biomaterial basado en alginato y gelatina para el desarrollo de cultivos tridimensionales
    (Universidad EIA, 2023) Ríos Vergara, Julieta; Echeverri Cuartas, Claudia; Toro, Lenka
    RESUMEN: los biomateriales en cultivo celular permiten imitar el comportamiento de la matriz extracelular (MEC) fielmente brindando soporte y nutrientes. La gelatina y el alginato de sodio son biomateriales muy utilizados en cultivo por su biocompatibilidad y baja citotoxicidad. Por otro lado, los esferoides celulares facilitan la formación de interacciones célula-célula en las tres dimensiones, como se encuentra en la fisiología de los organismos. En búsqueda de un cultivo celular que brinde la oportunidad de imitar ambos comportamientos, se planteó la encapsulación de esferoides en matrices Alg-Gel en tres proporciones distintas (50:50, 70:30 y 80:20) para encapsular esferoides de NIH3T3 (línea celular de fibroblastos de ratón) cultivados usando el método de gota colgante, a través del entrecruzamiento iónico con CaCl2 100 mM. Se caracterizaron las matrices de Alg-Gel (espectrometría de transformada de Fourier -FTIR-, evaluación de morfología, hinchamiento y degradación por gravimetría, evaluación de esterilidad y evaluación de citotoxicidad) y el cultivo de esferoides en sus pre y post encapsulación (microscopia óptica, microscopia de fluorescencia y ensayo MTT) con el fin de observar el comportamiento de estos y los posibles factores asociados a la matriz que influyan sobre su crecimiento y desarrollo. Al final se demostró que la matriz Alg-Gel 80:20 presentaba el mayor porcentaje de hinchamiento (34.91 %) demostrando una posible mayor presencia de poros; además, se evidenció que el medio de cultivo celular afecta la integridad de las matrices, dificultando su manipulación a largo plazo. Se determinó que el tamaño promedio de los esferoides antes de ser encapsulados era de 181.85 ± 9.70 μm y, además, se observó que el ensayo de MTT para la evaluación de los esferoides tuvo absorbancias bajas, aun cuando este se trataba de un esferoide viable, ya que se evidenció la formación de cristales de formazán y se observó la morfología de este por microscopia electrónica de barrido -SEM. Los esferoides encapsulados en las matriz Alg-Gel mostraron tener menor tamaño que el control (control = 211.55 ± 19.68 μm; 50:50 = 193.77 ± 18.67 μm; 70:30 = 191.20 ± 16.63;y 80:20 = 183.54 ± 19.14 μm), y la disminución de su tamaño se relacionó con la cantidad de Alg, lo cual brindaría la oportunidad de un cultivar esferoides con control de tamaño. Todas las matrices de Alg-Gel demostraron ser viables según la norma ISO 10993 tanto para los ensayos de citotoxicidad directa e indirecta a esferoides, resaltando el hecho que en ambos casos la matriz Alg-Gel 80:20 representaba una alta viabilidad, con porcentajes equivalente a 113.58 % (indirecta) y 99.36 % (directa). Estos resultados sugieren que la matriz Alg-Gel 80:20 puede tener un uso prometedor para la encapsulación de esferoides; sin embargo, se debe indagar más a fondo con respecto a los métodos de evaluación de esferoides para corroborar el efecto positivo de Alg. Además, se recomienda la implementación de métodos que mejoren las características en presencia del medio de cultivo de las matrices, en general.
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    PublicaciónAcceso abierto
    Dental pulp stem cells extraction, culture and cryopreservation protocol
    (Universidad EIA, 2020) Cuadros Herrón, Alejandra; Puerta Mejía, Valentina; Toro, Lenka
    RESUMEN: Durante las últimas décadas se ha evidenciado una creciente demanda de células madre, tanto para su investigación como para sus potenciales aplicaciones. Las células madre son altamente importantes en la ingeniería de tejidos y en la medicina regenerativa gracias a su capacidad de autorrenovarse y diferenciarse según su ubicación o su potencial. Estas células constituyen la base de la biología moderna y gracias a los estudios que se han venido haciendo con ellas se ha logrado cerrar la brecha existente en esta área del conocimiento. La implementación de estas células es vital para mejorar la salud, calidad y esperanza de vida de la humanidad debido a que son pieza fundamental para el tratamiento de enfermedades isquémicas, degenerativas y diferentes traumas. Gracias al impacto que ha causado el uso de estas células en la medicina regenerativa actual y el aumento en sus aplicaciones se ha visto necesario contar con biobancos, repositorios biológicos específicos para estas células y allí poder almacenarlas para su posterior uso con fines investigativos. La función mencionada anteriormente de las células madre en la medicina regenerativa y la ingeniería de tejidos sirve como motivo para implementar un biobanco en la Universidad EIA en el cual se puedan almacenar las células que serán previamente extraídas de pulpa dental (considerado material de descarte), cultivadas y criopreservadas para poder llevar a cabo las diferentes investigaciones que se requieran para dichas áreas en esta institución. El objetivo principal de este proyecto fue diseñar protocolos específicos de extracción, cultivo y criopreservación de las células madre de la pulpa dental para poder establecer una metodología estándar y así poder garantizar resultados óptimos, y constatar el adecuado funcionamiento del biobanco y la viabilidad de las células manipuladas. Se eligieron las mejores condiciones de cultivo, incluyendo 1% ATB + 10% DMSO + DMEM y se evaluó la viabilidad de las células, y se obtuvo una viabilidad máxima de 99.1%. Luego, las DPSCs fueron congeladas bajo 2 condiciones diferentes, 10% DMSO y 10% Glicerol durante 1 y 2 meses, se evalúo la viabilidad después de la criopreservación y se observó que la muestra que mejor porcentaje de viabilidad mostró fue la que estaba sometida a 10%DMS y 1 mes de congelación.
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    PublicaciónAcceso abierto
    Evaluación de la viabilidad y proliferación celular de cultivos tridimensionales de células de carcinoma colorrectal para posibles aplicaciones en el tratamiento del cáncer
    (Universidad EIA, 2024) Gamero Ferrer, Andrea Carolina; Toro, Lenka
    RESUMEN: el cáncer colorrectal (CCR) constituye un importante problema de salud en el mundo. Se espera que a nivel mundial las cifras de CCR alcancen los 3,2 millones en 2040, según la proyección del envejecimiento, el crecimiento de la población y el desarrollo humano. Pese a los avances logrados en la comprensión de su fisiopatología, las nuevas opciones de tratamiento y el manejo convencional de esta enfermedad, la baja precisión de muchos de estos tratamientos, producen la devastación tanto de las células tumorales como de las células sanas próximas al tumor, ocasionando daños y patologías en órganos que inicialmente no se encontraban afectados. La implementación de cultivos celulares en el área de investigación es un recurso con gran auge en la actualidad. Su aplicación para el desarrollo de productos farmacéuticos como los medicamentos es esencial dado que estos requieren de fases de estudio que confirmen su seguridad previa a la comercialización, destacando la fase preclínica en donde se realizan pruebas in vitro. Adicionalmente, los cultivos celulares son primordiales en áreas de la salud como las terapias avanzadas, donde pueden emplearse en tratamientos individualizados y con mejor focalización. Es por ello que los cultivos celulares para ser considerados viables deben contar con condiciones que garanticen un comportamiento lo más similar a las condiciones biológicas, de modo tal que permitan la obtención de resultados cuya información pueda ser considerada representativa de las condiciones fisiológicas, dándole así a los cultivos una gran pertinencia. En este trabajo de investigación, se evaluó la viabilidad celular mediante ensayos de exclusión haciendo uso de azul de tripano, así como, la proliferación celular implementando microscopía electrónica de barrido. Mediante el método de la gota colgante se obtuvieron esferoides de la línea celular Caco-2 con diámetros entre los 50 μm y 150 μm. Los esferoides obtenidos fueron evaluados en distintas condiciones y se estipularon los parámetros que favorecen la medición de la viabilidad y proliferación celular. Para la viabilidad, se utilizaron dos soluciones enzimáticas, tripsina y acutasa. Para la tripsina, se evaluaron concentraciones de 0,15 %, 0,20 % y 0,25 % y se evidenció que las condiciones para garantizar una correcta disgregación de los esferoides fueron mayormente significativas para los días 5 y 6 de cultivo, donde resulto más conveniente implementar una concentración de tripsina/EDTA al 0,20 % por 10 minutos con la finalidad de obtener una mayor disgregación de células y una mayor viabilidad relativa a esta.
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    PublicaciónAcceso abierto
    Formation of three-dimensional cell culture of colorectal carcinoma cells for possible applications in alternative cancer treatment in vitro
    (Universidad EIA, 2023) Parias Carreño, Andrés Felipe; Toro, Lenka
    ABSTRACT: according to the Global Cancer Observatory, colorectal cancer (CRC) is the third most recurrent cancer worldwide and in Colombia. For 2022, the American Cancer Society previewed that it will be the cause of death of 52,580 persons. Current conventional treatments can generate adverse effects and there is a need for new alternative methods to fight this disease. In order to test these new alternative methods, there is a need for a model that correctly represents the human tissue microenvironment to determine the possible effect of these new treatments. 3D models have the ability to form cell-to-cell interactions, mimic in vivo inflammatory response, develop drug resistance and allows the possibility for evaluating the treatment targeting capabilities. In this work the use of 3D cancer cell cultures is proposed as a possible model for the evaluation of novel alternative methods to fight colorectal cancer. The main objective of this project is to evaluate the ability of cancer cell line Caco-2 to form a 3D cell culture for possible applications in alternative colorectal cancer treatment. For the project execution, the culture conditions for 2D cell cultures were established based on a literature review in order to determine the 3D cell culture conditions. For the formation of the 2D culture and subcultures different experimental setups were tested to identify the best conditions for the 2D cell culture. The 3D cell culture was formed using the hanging drops method in droplets of 25 µL to obtain Caco-2 derived spheroids. The spheroids growth formed with different cell concentrations was observed to determine which conditions provided the best results for the formation of the spheroids. After the spheroids were formed the viability was evaluated by measuring the metabolic activity of the cells in the spheroids and the response to fluorescent dyes. To evaluate the proliferation a measure of the diameter of a single cell inside the droplet was recorded in day 1 and compared to the diameter of the spheroids formed. Morphology was observed under Scanning Electron Microscopy and all the results were evaluated using statistical analysis to determine the significance. As a result, Caco-2 derived spheroids were formed in 6 days under different cell concentrations with average diameters ranged between 70 and 80 µm in complete culture media supplemented with 20% FBS and 0.1% gentamycin with no additional supplements.