Examinando por Autor "Marín Muñoz, Paula Andrea"
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Publicación Acceso abierto Diseño Del Bioreceptor de un Inmunosensor Piezoeléctrico para la Detección de un Antígeno Nativo de Mycobacterium Tuberculosis(Universidad EIA, 2013) Marín Muñoz, Paula AndreaLa tuberculosis (TB) es una de las enfermedades infecciosas más importantes en el mundo y el diagnóstico oportuno sigue siendo un desafío para su control. Como métodos convencionales de diagnósticos para la TB, se han usado el examen directo con coloración de esputo y el cultivo para determinar la presencia de la micobacteria; sin embargo, estos métodos presentan ciertas desventajas que limitan las posibilidades de detección temprana y tratamiento eficaz de la enfermedad. En vista de estas limitaciones, en los últimos años se ha avanzado en el estudio de métodos alternativos de detección basados en inmunoensayos, los cuales faciliten el diagnóstico temprano y favorezcan el tratamiento eficaz de casos activos, disminuyendo las tasas de morbimortalidad asociadas con esta enfermedad. Sin embargo, estos métodos de diagnóstico enfrentan retos importantes en cuanto a sensibilidad y especificidad, haciendo necesario el desarrollo de técnicas para el aislamiento de componentes propios del patógeno, como el antígeno de secreción 38kDa, que posiblemente sean buenos marcadores biológicos para la detección de la tuberculosis. Estos biomarcadores purificados, al ser empleados en las técnicas de detección inmunológicas, bien sea implementados en ensayos tipo ELISA o en inmunosensores, podrían incrementar los niveles de sensibilidad y especificidad del ensayo y además podrían ser utilizados en el monitoreo de la eficacia del tratamiento. En el presente trabajo, se presentan las etapas de diseño de un bioreceptor para la detección del antígeno 38kDa nativo de la cepa autóctona circulante en la región antioqueña de Mycobacterium tuberculosis (Mtb) LAM09 que incluye, la purificación del antígeno de secreción, la biofuncionalización de cristales piezoeléctricos con el antígeno proteico y la caracterización topográfica mediante microscopía de fuerza atómica (AFM) de las superficies biofuncionalizadas. Con la metodología mencionada se obtuvieron cristales piezoeléctricos funcionalizados con antígeno de secreción enriquecido en Ag38kDa nativo purificado de filtrados de cultivo de Mtb LAM09 empleado la técnica de cromatografía de afinidad y con proteínas de secreción filtradas de cultivo CFP. Los cristales fueron biofuncionalizados mediante la técnica de monocapas autoensambladas (SAM) modificada y las superficies inmovilizadas caracterizadas cualitativamente con AFM. Estos cristales inmovilizados podrían ser acoplados a un sistema de caracterización de señales de un sensor piezoeléctrico para la detección del antígeno 38kDa nativo de Mtb autóctona.Publicación Acceso abierto Evaluación del efecto matriz en un ensayo ELISA competitivo usando muestras clínicas para la detección del biomarcador Ag38kDa de tuberculosis(Universidad EIA, 2018) Galeano Naranjo, Carolina; Marín Muñoz, Paula Andrea; Universidad EIALuego, se evaluó el efecto matriz de muestras de esputo sobre la curva de calibración competitiva estándar encontrada anteriormente. Para esto se realizó la dilución de muestras de esputo negativo para Tb, en tampón fosfato salino con tween al 0,05% (PBST) como el solvente estándar del ensayo competitivo. Dichas muestras diluidas fueron contaminadas con las concentraciones conocidas del Ag38kDa para realizar la competición con los inmunoreactivos establecidos a las concentraciones (0.03 g/mL – 0.012 g/mL). Usando las diferentes diluciones de muestras de esputo como solventes de las curvas de calibración se evaluó como afecta la matriz de la que se componen estas muestras, a los parámetros analíticos de la curva de calibración previamente hallada. De este ensayo de efecto matriz se obtuvo que, el cambio parcial o total del solvente estándar por esputo genera una reducción de la señal proporcional a la cantidad de esputo que se utilice como solvente, es decir, que mientras más esputo sea utilizado mayor será la caída de la señal. Por otra parte, los resultados mostraron que una dilución adecuada de muestras de esputo en PBST de 1:100 puede ser usada para la detección del Ag38kDa con anticuerpo anti38kDa (Myc31) en estas muestras, sin afectar las características analíticas del ensayo, debido a que esta dilución presentó una pérdida mínima de la señal máxima y aumentó la sensibilidad de la prueba, en comparación a las demás proporciones de esputo incluso a la curva estándar en PBST.Publicación Acceso abierto Evaluación del fenómeno de fluorescencia asociado a la interacción de nanoestructuras de carbono con inmunoreactivos(Universidad EIA, 2020) Moncada Barrera, Manuel Santiago; Jaramillo Grajales, Marisol; Marín Muñoz, Paula AndreaRESUMEN: El diagnóstico rápido de una enfermedad es considerado factor un clave en la supervivencia y la calidad de vida del paciente, debido a esto en los últimos 5 años se han venido desarrollando numerosas técnicas de diagnóstico rápidas, específicas y sensibles. Tal es el caso de los inmunosensores, descritos como un dispositivo analítico que consiste en un componente biológico, generalmente un anticuerpo o antígeno, en contacto directo con un transductor físico que transforma la señal generada por el componente biológico en una señal medible; asimismo, en el continuo intento por mejorar la calidad analítica, la sensibilidad y la especificidad de las técnicas de diagnóstico se han propuesto inmunosensores basados en puntos cuánticos o nanoestructuras de carbono por sus características de fluorescencia promisorias. En el presente trabajo de grado, se evaluó el fenómeno de fluorescencia de las nanoestructuras de carbono conjugadas con albúmina de suero bovino (BSA) mediante la extinción de fluorescencia con óxido de grafeno (GO) y la recuperación de fluorescencia con anti-BSA, como punto de partida para su potencial aplicación como biosensores en la línea de investigación de ‘Tecnologías para la obtención y detección de biomarcadores’ de la Universidad EIA. Los resultados obtenidos demostraron que una concentración de 25 ppm de GO es capaz de extinguir en un 45 % la fluorescencia de nanoestructuras de carbono conjugadas con BSA a 125 ppm, además, también se encontró que la anti-BSA a una concentración de 0.5 μg/mL es capaz de recuperar la fluorescencia de la muestra anterior en un 22 %. Además, se encontró que las nanoestructuras de carbono con que se desarrolló el presente trabajo de grado clasifican como puntos de carbono.Publicación Acceso abierto Evaluación in vitro de una formulación de resveratrol como posible tratamiento de la retinopatía diabética(Universidad EIA, 2023) González Pérez, Juliana; Londoño López, Martha Elena; Arévalo Alquichire, Said; Marín Muñoz, Paula AndreaRESUMEN: La retinopatía diabética proliferativa se caracteriza por la formación de vasos sanguíneos frágiles que pueden causar hemorragia vítrea o desprendimiento de retina a medida que los vasos crecen en el vítreo, lo cual incrementa sustancialmente el riesgo de pérdida visual, como consecuencia adicional de la inflamación crónica y estrés oxidativo. Los efectos secundarios de los tratamientos actuales sugieren la búsqueda de tratamientos complementarios menos invasivos que permitan la administración de agentes terapéuticos en el sitio específico. El resveratrol (RSV) se postula como una molécula prometedora debido a sus propiedades antioxidantes, antiinflamatorias y antiangiogénicas, y que ha sido ampliamente reportado en el tratamiento de enfermedades oculares. A su vez, las nanosuspensiones para la administración tópica del fármaco son una alternativa que puede complementar los tratamientos actuales, y que puede conservar las propiedades del RSV, aumentando su solubilidad y biodisponibilidad. Con el desarrollo de esta investigación se evaluó el efecto antiinflamatorio y antiangiogénico de una nanosuspensión de resveratrol (RSV-NS) como posible tratamiento para la retinopatía diabética proliferativa. Las propiedades morfológicas y estructurales se analizaron mediante dispersión dinámica de luz, microscopía electrónica de transmisión de barrido y espectroscopia infrarroja por transformada de Fourier. Los efectos biológicos de RSV-NS fueron inicialmente analizados en un cultivo primario no estimulado de células endoteliales microvasculares de retina humana (HRMECs), a través del estudio de la actividad metabólica, citotoxicidad y proliferación. El efecto antiinflamatorio de RSV-NS se evaluó en las HRMECs estimuladas con TNF-⍺ con la expresión de ARN mediante RT-qPCR; por otro lado, el efecto antiangiogénico de la RSV se estimó en las HRMECs estimuladas con VEGF mediante ensayos de proliferación, migración y formación de tubos. RSV-NS presentó una apariencia traslúcida, con un tamaño promedio de partícula de 304,0 ± 81,21 nm, índice de polidispersión de 0,225 ± 0,036, distribución de partícula monomodal uniforme, y una morfología con tendencia esférica menor a 500 nm. De acuerdo con los ensayos de MTT/CCK-8 y LDH, la actividad metabólica promedio de RSV-NS a 18,75 µM fue mayor al 70 %, comparado con el control, sin tener efectos citotóxicos en las células. Para los modelos celulares in vitro de estrés celular, en donde las HRMECs fueron a estimuladas con TNF-⍺ o VEGF para simular las condiciones de la retinopatía diabética, hubo una disminución significativa en la expresión de TNF-⍺ e IL-6 cuando las células fueron tratadas con 18,75 µM, respecto al control estimulado con 10 ng/mL de TNF-⍺. Asimismo, RSV-NS a 18,75 µM redujo la proliferación, migración celular y formación de tubos en el modelo in vitro estimulado con VEGF a 10 ng/mL. En conclusión, los resultados de este proyecto sugieren un posible efecto antiinflamatorio y antiangiogénico de una nanosuspensión de resveratrol en modelos in vitro de estrés en HRMECs estimuladas con TNF-⍺ o VEGF, para su potencial aplicación en el tratamiento de la retinopatía diabética proliferativa.Ítem Acceso abierto Informe final de semillero de investigación 2022-2(2022-12-06) González Pérez, Juliana; Osorio Solórzano, Miguel; Gil Castaño, Simón; Lopera, Aura María; Osorio Osorno, Yuliana Andrea; Marín Muñoz, Paula Andrea; Universidad EIAEstudiar las bases moleculares de los inmunoensayos de afinidad y su aplicación en la detección y cuantificación de biomarcadores mediante ensayos de ELISA bidimensional y competitivo.Publicación Acceso abierto Informe Semillero 2021-2Marín Muñoz, Paula Andrea; Angie Liseth Prada; Emanuel Ballesteros Jaramillo; Juliana Tobón Fernandez; Kitty Vanesa Ortega; Manuel José Ortiz; Camilo Maldonado Zuluaga; Eduard Alexander CordobaEn este informe se describen las principales actividades realizadas en el semillero durante el semestres 2021-2. Presentaciones magistrales, planeación y experimentación, resultados y conclusiones así como se identifican oportunidades de mejora.Ítem Acceso abierto Metodología de purificación del complejo proteico SOSS para su uso en estudios de caracterización estructural(Universidad EIA, 2023) Maldonado Zuluaga, Camilo; Marín Muñoz, Paula AndreaRESUMEN: En una célula eucariota la función más importante del ciclo celular es duplicar la gran cantidad de material genético organizada en sus cromosomas y segregar dos copias de esta información en dos células hijas genéticamente idénticas. La integridad genómica de una célula es constantemente lesionada por mecanismos endógenos y exógenos conduciendo a la formación de mutaciones importantes y otros desordenes en el metabolismo celular. En respuesta a los diferentes tipos de daño en el genoma, la célula ha desarrollado diferentes mecanismos de reparo especializados, entre ellos el mecanismo de recombinación homóloga (HR) para reparación de roturas de doble cadena de ADN. Se sabe que una de las proteínas que participa del proceso de HR y media en su regulación es el complejo proteico SOSS (Sensor of Single Stranded DNA) sin embargo, no se conoce con claridad su rol en este mecanismo de reparación. Para entender su papel en este y otros procesos es importante obtener un modelo tridimensional del complejo para determinar la función específica de esta proteína a partir de su estructura y conformación. Para que este complejo pueda ser analizado estructuralmente debe ser purificado y homogenizado antes de ser estudiado desde el punto de vista estructural. En la presente tesina se desarrolló una metodología de purificación para el complejo proteico SOSS que permitió obtener una muestra con alto contenido de proteína y con un nivel de homogeneidad adecuado para posteriores estudios de caracterización estructural mediante microscopía crioelectrónica. Para ello se plantearon las condiciones más relevantes para la purificación del complejo SOSS y se establecieron los parámetros de la purificación. Luego se implementó la tecnología del ADN recombinante en células de insecto para obtener extractos proteicos con alto contenido del complejo SOSS soluble. Finalmente, empleando la técnica de cromatografía de afinidad en columnas de Níquel se obtuvo la proteína purificada y su homogeneidad fue valorada mediante la técnica de tinción negativa. Adicionalmente, se presentan resultados de caracterización del complejo proteico MRN (MRE11 – RAD50 – NBS1) mediante ensayos de nucleasas como método inicial para estimar la interacción entre el complejo SOSS y el complejo MRN, un clásico sensor del mecanismo de HR luego de una ruptura de doble cadena en el ADN.